Perfil Lipidico

UNIVERSIDAD DE ORIENTE
NUCLEO BOLIVAR
ESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUD
DEPARTAMENTO DE BIOANALISIS
BIOQUIMICA CLINICA
Perfil Lipidico
Bachiller: Luis Gutiérrez
Profesor: Germán Guzmán
Cuidad Bolívar, junio del 2008

Introducción

El perfil lipídico es un grupo de exámenes de sangre que indican la forma como su cuerpo utiliza, cambia y almacena los lípidos. Los lípidos son grasas que no pueden disolverse en la sangre. Los lípidos se pegan a las proteínas en la sangre recibiendo así el nombre de lipoproteínas. La cantidad de lipoproteínas en su sangre puede cambiar dependiendo de lo que usted come, de una enfermedad o por herencia. Algunos de estos lípidos son el colesterol y los triglicéridos.
El perfil lipídico sirve para saber si usted está en peligro de contraer una enfermedad cardíaca. También sirve para conocer el efecto de las medicinas

No coma ni beba nada excepto agua, 12 horas antes de ser extraída la sangre. Puede ser necesario suspender las medicinas antes del examen. Consulte con su médico para saber si usted debe suspender sus medicinas habituales antes del examen.

Un paramédico le colocará una banda elástica y ancha (torniquete) alrededor de su brazo y la apretará. Su piel será limpiada con alcohol. Una pequeña aguja unida a un tubo de ensayo especial, será colocada en una vena de su brazo o mano. El tubo hace succión para extraer la sangre hacia él. Cuando el tubo se llena, se retiran la banda de caucho, la aguja y el tubo de ensayo. El paramédico presionará con un algodón el sitio en el que estuvo la aguja. Es posible que le pidan que presione el algodón en el sitio por unos minutos para detener la sangre. Le pueden colocar esparadrapo sobre el algodón para sostenerlo en su brazo.

Después del examen. A los 20 o 30 minutos de haber pasado la extracción de la sangre, usted podrá retirar el esparadrapo y el algodón de su brazo. Llame a su medico en ____ días para conocer el resultado del examen. Su médico le explicará lo que el resultado del examen significa para usted.

Acuerdos sobre su cuidado: Usted tiene el derecho de participar en el plan de su cuidado. Para participar en este plan, usted debe aprender acerca de su enfermedad, lesión, cirugía o procedimiento. De esta forma usted y su médico pueden hablar acerca de sus opciones y decidir que tratamiento se usará para su cuidado. Usted siempre tiene el derecho a rechazar su tratamiento.

Determinación de colesterol total
Fundamentos del Método.
Inserto de la Casa Comercial Laboratorios Biogamma C.A.
Colesterol Total.

Para la determinación de colesterol total se utilizan reactivos comerciales que incluyen las enzimas y sustratos necesarios para la cuantificación de todas las formas de colesterol presentes en el suero (Kit comercial de Biogamma C.A. Colesterol Total.
La determinación del colesterol total esta basado en el procedimiento enzimático (descrito por Allan):
Colesterol esterasa

Esteres de colesterol=====Colesterol Libre + Ácidos Grasos
Colesterol oxidasa
Colesterol Total + Oxigeno=====Colest- 4- en -3- one + H2O2
Peroxidasa
Fenol + 4-aminoantipirina + 2 H2O2=====Cromoforo de quinoneimina + 4H2O
Reactivos usados

-Reactivo enzimático. Contiene: 4- aminoantipirina, Fenol, Colesterol Estearasa, Colesterol Oxidasa, Peroxidasa, activadores, estabilizadores y Buffer. Condiciones: refrigerado entre 4-8 ºC.

-Estándar de Colesterol (200 mg %): es una solución de colesterol monometil etilenglicol, y activadores. Condiciones: refrigerado entre 4-8 ºC, o a temperatura ambiente (25 ºC)
Precaución: las soluciones de estándar son venenosas si son absorbidas a través de la piel y muy peligrosa si se inhalan sus vapores. Lave las manos vigorosamente después de su uso.
Muestra.
-Suero recién extraído y no hemolizado. También se pueden usar plasma obtenido con EDTA.

El colesterol en suero o plasma es estable:

-Por 5 día a temperatura ambiente.
-2 semanas refrigeradas
-6 meses si se congela.
Recomendaciones: Un ayuno de 12-14horas antes de la extracción de la muestra, sobre todo si también se le va hacer la determinación de triglicéridos a la misma muestra. Sin no cumplen este requisito no deben usarse para determinar colesterol y HDL-Colesterol.
Limitaciones del Método.

-Niveles de ácido ascórbico tan altos como 10 mg %, No Interfieren en la prueba
-El presente método de Colesterol, á demostrado ser lineal hasta 500 mg/dl. Mas allá de este límite, las muestras deberán diluirse con solución salina (0,85%) y ensayadas nuevamente. El nuevo resultado deberá multiplicarse por el factor de dilución
Procedimiento del método.
Marcar 3 tubos: Tubo 1 para la muestra (M), Tubo 2 para el estándar de referencia (ER) y Tubo 3 para blanco reactivo (BR).
A cada tubo (1, 2 y 3) agregar 1 ml de reactivo de colesterol.
Pipetear 0,010 ml de la muestra y agregar al tubo 1. Tape y mezcle por inversión.
Pipetear 0,010 ml de estándar de colesterol total y agregar al tubo 2. Tape y mezcle por inversión.
Pipetear 0,010 ml de agua destilada y agregar al tubo 3. Tape y mezcle por inversión.
Incubar todos los tubos a 37 ºC por 5 minutos en baño de maría, o 15 minutos a temperatura ambiente.
Después de incubar, mezclar por inversión cada tubo y lea en el espectrofotómetro dentro de los 30 minutos siguientes.
Leer a 500 nm, llevar a 0% abs., con el blanco reactivo. Leer el tubo 1 y 2 y anotar las Absorbancias. (esto dependerá del equipo utilizado, algunos dan las concentraciones del analito en estudio).
Se utilizo un aparato manual (génesis)
Nota: control de calidad se recomienda el uso de sueros controles normales y anormales, comerciales de calidad reconocida.
----------------Muestra------------Estándar-----------Blanco reactivo
Muestra-----0.010ml------------------------------------------------------
Estándar----------------------------0.010ml-------------------------------
Reactivo--------1ml-------------------1ml-----------------1ml-----------
Colesterol

Determinación de HDL-colesterol

Para la determinación del colesterol presente en las principales lipoproteínas que lo contienen como HDL (lipoproteínas de alta densidad) y LDL (lipoproteínas de baja densidad), es necesario:
1, la separación selectiva de la lipoproteína correspondiente con agentes precipitantes.
2, la cuantificación del colesterol presente en dicha lipoproteína como se indicó anteriormente.
Este es un procedimiento de separación únicamente, para determinar los valores de HDL colesterol, se debe utilizar 0.050ml del sobrenadante obtenido por este procedimiento del colesterol total
-Pipetear 0.5ml de la muestra y agregar en un tubo
-Agregar 0.05ml de reactivo precipitante
Entre estos reactivos precipitantes están el ácido fosfotungstico y magnesio que precipitan a las LDL y VLDL (lipoproteínas de muy baja densidad) mientras que las HDL permanecen en solución
-Agitar vigorosamente
-Reposar en el refrigerador por 15 minutos
-Centrifugar por 10 minutos entre 3500-4000rpm
-Y del sobrenadante tomar los 0.050 ml de muestra para determinarle HDL= colesterol
Esquema de trabajo
----------------Muestra------------Estándar-----------Blanco reactivo
Muestra-----0.050ml------------------------------------------------------
Estándar----------------------------0.050ml-------------------------------
Reactivo--------1ml-------------------1ml-----------------1ml-----------
Colesterol
Mezclar e Incubar 5 min a 37ºC (ó 10 min a temperatura ambiente).
Leer la absorbancia a 505 nm.

Determinación de triglicéridos

Para la determinación de triglicéridos en suero se utilizan reactivos comerciales (Kit comercial de CHEMROY) que incluyen las enzimas y sustratos necesarios para la cuantificación por espectrofotometría visible.

Fundamento del método

Para la determinación colorimetrica cuantitativa enzimático de triglicéridos en suero o plasma
Para establecer el diagnostico de hiperlipoproteinemia primaria o secundaria, es muy útil la cuantificación de triglicéridos en conjunto con otros lípidos.
También es útil para dar seguimiento a la diabetes mellitus, nefrosis, obstrucción biliar y varias anormalidades metabólicas que resultan de disturbios endocrinos

Las reacciones que tienen lugar son:

Lipasa
Triglicéridos + H2O=====Glicerol + Ac. Grasos
GK
Glicerol + ATP====Glicerol-3-P + ADP
GPOD
Glicerol-3-P + O2====Dihidroxiacetona + H2O2
POD
H2O2 + p-clorofenol + 4-AP====Quinona + H2O

1. Una lipasa hidroliza los triglicéridos dando glicerol mas ácidos grasos libre.
2. El glicerol formado es sustrato de una glicerol quinasa que en presencia de ATP lo f osforila a glicerol 3P.
3. El glicerol 3P es oxidado a dihidroxiacetona por una glicerol fosfato oxidasa dando también peróxido de hidrógeno.
4. El peróxido de hidrógeno junto con los cromógenos p-clorofenol y 4-AP son sustrato de una peroxidasa para formar una quinona roja cuantificable a 505 nm. La quinona formada es proporcional a la concentración de triglicéridos presente en la muestra.

Reactivo

-Triglicéridos reactivo
-Triglicéridos activador
-Estándar triglicéridos 200 mg/dl
Precauciones

-Uso de diagnostico in Vitro
-Los reactivos y el estándar contienen azida de sodio como conservador

Material requerido

-Espectrofotómetro
-Baño de maria a 37’C
Muestra

-La heparina y EDTA son los anticoagulantes de elección.
-No deben usarse fluoruros ni oxalatos. Separa el suero o el plasma
-Los TG son estables por 10 días a 2-8’C
-No deje las muestra a temperatura ambiente, ya que los fosfolipidos pueden hemolizarse liberando glicerol libre, falsamente aumentados los TG
Sustancias interferentes
-No debe usarse material que contenga glicerina
-Muestras hemolizadas

Procedimiento

Esquema de trabajo
----------------Muestra------------Estándar-----------Blanco reactivo
Muestra-----0.01ml------------------------------------------------------
Estándar----------------------------0.010ml-------------------------------
Reactivo--------1ml-------------------1ml-----------------1ml-----------
Mezclar e Incubar a 37ºC 5 min (ó 10 min a temperatura ambiente). Leer la absorbancia a 505 nm de la Mx y St
Nota: Control de calidad se recomienda el uso de sueros controles normales y anormales, comerciales de calidad reconocida


Datos

Conc ST colest = 200mg/dl
Abs ST colest = 0.153 Abs
Abs Mx colest= 0.095Abs
Conc ST HDL-C= 50mg/dl
Abs ST HDL-C= 0.284 Abs
Abs Mx HDL-C= 0.086 Abs
Abs ST TG= 0.280 Abs
Abs Mx TG= 0.150 Abs

Calculos de Concentraciones:
Trigiceridos
0.57/280 x 200= 112.14 mg/dl

Colesterol
200/0.153 x 0.095= 124.18 mg/dl

HDL- C
50/0.284 x 0.086 x 1.1= 16.6 mg/dl



Perfil lipidico

==========Valor obtenido =========Unidades========Valor de ref.
Colesterol total=== 125 ==============mg/dl =========150-250 mg/dl
Triglicéridos===== 112 =============mg/dl ===========50-140 mg/dl
VLDL-C ======= 11 ==============mg/dl ============16- 36mg/dl
LDL-C ======== 107 =============mg/dl ============83-140mg/dl
HDL-C ======== 17 ============= mg/dl ============39- 43mg/dl

Conclusion

El perfil lipidico obtenido de la paciente anterior de 29 años. Se ontuvo valores dentro de los niveles fiiologicos normales. Por ende se descarta algun tipo de patologia sugestiva a traves de la prueba de perfil lipidico. Tanto el CT, HDL, LDL, VLDL. estan en los valores de Referencia.