Enzima CK-MB Cardiaca.

UNIVERSIDAD DE ORIENTE
NUCLEO BOLIVAR
ESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUD
DEPARTAMENTO DE BIOANALISIS
BIOQUIMICA CLINICA

Perfil Enzimático para la valoración del Infarto Agudo de Miocardio
Determinación de CK.M
Bachiller: Luis Gutiérrez
Profesor: German Guzmán
Cuidad Bolívar, Junio del 2008

Introducción
La creatina quinasa (ATP:creatina N-fosfotransferasa, EC2.7.3.2) es una enzima dimérica compuesta por dos tipos de subunidades monoméricas, M (Muscular) y B (Cerebral). Las subunidades se combinan para formar tres isoenzimas CK distintas, CK-BB (CK-1), CKMB (CK-2) y CK-MM (CK-3). CK-MM es la forma predominante de CK en los músculos esqueléticos. CK-BB se encuentra en el cerebro y en los músculos esqueléticos. CK-MB se encuentra en alta concentración en el miocardio (entre 14 y 42%) y en menor proporción en los músculos esqueléticos. En ausencia de enfermedad, la mayor parte de la actividad de la CK en el suero se debe a la isoforma CK-MM. Los daños en el miocardio, como los presentes en el infarto de miocardio agudo (IMA), tendrán como resultado un aumento de los niveles circulatorios de la isoforma CK-MB. Generalmente los niveles de CK-MB aumentan entre 4 y 6 horas después de la aparición del dolor de pecho, alcanzando un pico entre las 12 y 24 horas y volviendo a los niveles iniciales antes de 48 horas. En los casos en los que existan sospechas de un IMA; se recomienda la determinación de CK-MB, generalmente en el momento del ingreso y 6 horas, 12 horas y 24 horas más tarde.

Fundamento del método
Método UV para la determinación de la isoenzima MB de cretina kinasa en suero o plasma mediante anticuerpos monoclonales anti CK-M
El método se basa en la inhibición específica de las unidades CK- M con anticuerpos monoclonales anti CK- M, los anticuerpos inhiben tanto la isoenzima MM como las subunidades M correspondientes a CK- MB. Las subunidades B se determinan mediante el empleo de un sistema reactivo basado en una técnica analítica optimizada por la IFCC, con N acetilcisteina como activador adicionado de anticuerpos monoclonales anti CK- M.

Reactivos provistos
-Buffer: solución de buffer imidazol, 100 mmol/l, pH 6,7
-Sustratos viales: para determinaciones individuales conteniendo cantidades suficientes una vez reconstituido.
-Suero control: vial conteniendo suero liofilizado.

Instrucciones para su uso
-Buffer: listo para usar.
-Sustrato: agregar 2,5 ml de buffer a un vial de sustrato. Agitar y etiquetar.
-Suero control: pipetear 1 ml de agua destilada y agregar al vial de suero liofilizado. Tapar y esperar 5 minutos para su uso.
Precauciones
-Los reactivos son para uso in Vitro.
-Suero control: debe ser tratado como material infectivo, a pesar de que ha sido analizado para HIV y HBV siendo no reactivo.
Instrucciones de almacenamiento
-Reactivos provistos: estables en refrigerador 2-10º C, hasta la fecha de vencimiento
-Sustrato reconstituido: refrigerado de 2-10º C, es estable 3 días a partir del momento de su reconstitución
-Suero control reconstituido: estable 3 días refrigerado 2-10º C, 2 días a 25º C o 3 meses congelado -20º C. No congelar y descongelar repetidamente.
Muestra
-Suero o plasma
-Si se utiliza plasma se debe utilizar heparina o EDTA como anticoagulante, o el empleo de anticoagulante W de Wiener Lab.
-Interferencia: sueros con hemolisis producen valores falsamente aumentados.
Material requerido
-Espectrofotometro.
-Micropipetas y pipetas.
-Baño de maría.
-Cronómetro.
Condiciones de reacción
-Longitud de onda: 340 nm, 334 o 366 Hg.
-Temperatura de reacción: 25, 30 o 37 ºC.
-Tiempo de reacción: 15 minutos.
Procedimiento
Sustrato reconstituido-------------------------------- 2,5 ml
Pre- incubar por unos minutos.
Muestra---------------------------------------------- 0,10 ml


Cálculos de los resultados
CK- MB (U/L) = Delta D Abs/min* Factor
Medida a 340 nm = CK- MB (U/L) = Delta D Abs/min* 8254
Medida a Hg 334 = CK- MB (U/L) = Delta D Abs/min* 8414
Medida a Hg 366 = CK- MB (U/L) = Delta D Abs/min* 14858
Valores de Referencia
Temperatura: 25 ºC----------------------------- 30 ºC ------------------------- 37 ºC
Valores: 10 U/L--------------------------- 16 U/L------------------------ 25 U/L

Resultados
Nombre y Apellido: Fanny Rodriguez
Edad: 23a

Valores Obtenidos CK-MB -------- 24 a 37º C
La creatina quinasa ( CK ) es una isoenzima presente en el músculo ( CK-M ) y en el cerebro(CK-B), y existe en el suero en forma de dimeros como CK-MM, CK-MB, CK-BB, y macroenzimas. La determinación de CK-MB es bastante específica para la confirmación de daños en el músculo cardíaco, siendo que la CK-BB está prácticamente ausente del suero y la CK-MM es abundante, dado su origen muscular.

Así la CK-MB es clínicamente utilizada para el diagnostico y monitorización de infarto de miocárdico. Y los resultados obtenidos en la dertminacion de CK.MB para la paciente fanny R, fue de 24U/L cuyo valor esta dentro de los valores de referencia (10U/L 37ºc) de CK.MB
La reacción para CK-MB consiste en la determinación directa de la actividad enzimático de la CK-B, después de la inhibición especifica de sus subunidad CK-M , en la CK-MM, i CK-MB. Esta inhibición se consigue a través de la unión de anticuerpos policlonales específicos del reactivo, que bloquean el sitio activo de la enzima, inhibiendo así su actividad.

En algunas ocasiones, debido a la naturaleza de la muestra analizada, y la composición del reactivo, los resultados pueden sufrir interferencias por reacciones inespecíficas con la subunidad CK-B.
Estas interferencias (sueros lipemicos, hemolizados…) generan resultados alterados, y no muestran el mejor comportamiento de la determinación.

Bibliografía
-Inserto CK- MB NAC. Unitest. Monoclonal. Wiener Lab 2000. Rosario- Argentina