domingo, 15 de junio de 2008

Fosforo Inorganico. Analisis de Laboratorio

UNIVERSIDAD DE ORIENTE
NUCLEO BOLIVAR
ESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUD
DEPARTAMENTO DE BIOANALISIS
BIOQUIMICA CLINICA




Fosforo Inorganico. Analisis de Laboratorio.






PROFESOR GERMAN GUZMAN




Integrante:
Gutiérrez Luís
C.I. 18.159.571





Ciudad Bolívar, Lunes 16 de Junio de 2.008







Fósforo inorgánico

Fundamento: la medición de fósforo inorgánico en suero es generalmente acompañada por la formación de un complejo de fosfomolibdato y posteriormente reducir este a un complejo de azul de molibdeno. Los métodos difieren en la selección del agente reductor, tales como: cloruro estañoso, finilhidrazina, acido aminonaftolsulfonico, acido ascórbico, p- metilaminofenolsulfato, N-fenil-p-fenilendiamina y sulfato ferroso. Estas técnicas presentan color inestable, pasos de desproteinizacion y complejidad en la ejecución del método. La adicion de un surfactante ha eliminado la necesidad de preparar un filtrado libre de proteínas, ha acelerado la producción de color, ha estabilizado el color y simplifico el procedimiento.

La medición cuantitativa del complejo de fosfomolibdato no reducido fue reportado por primera ves por simonsen en 1946 Daly y erthingshayse adaptaron la técnica para la determinación de fósforo inorgánico en 1972 Amador y Urdan modificaron este procedimiento adicional el mismo año. El presente método es una modificación del procedimiento que utiliza un solo reactivo estable que funciona en el rango UV.
Fósforo inorgánico + H2SO4 + molidbato de amonio-------à Complejo fosfomolidbato
sin reducir
El fósforo inorgánico reacciona con molidbato de amonio en un medio acido para formar un complejo de fosfomolidbato que adsorbe a una longitud de onda de 340 nm. La absorbancia a esta longitud de onda es directamente proporcional a la cantidad de fósforo inorgánico presente en la muestra.

Composición del reactivo:
Molidbato de amonio: 0.48 mM, Ac.Sulfurico: 220 mM, Surfactantes.
El reactivo viene preparado listo para su uso.
La muestra debe ser sin anticoagulante porque el anticoagulante produce falsos valores bajos. Tampoco muestras Hemolizadas. El suero debe ser separado rápido de los GR.


Se requerirá de un espectrofotómetro con marco de longitud de onda de 34º, pipetas agua destilada, cronometro...
En el laboratorio contamos con un microlab que facilita el trabajo y es semi-automatizado.

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Blanco
Standard
Reactivo
Muestra
---
---
10 uL
Standar
---
10 uL
---
H2O. D
10 uL
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---
Rect. Color
1 mL
1 mL
1 mL

Mezclar e incubar 2 minutos a temperatura ambiente (15.25ºC) leer la absorbancia en espectrofotometría a 650 nm. Llevar el aparato a cero con el Blanco

Calibración: se utiliza una sustancia de fósforo a 5 mg/dL o un calibrador.
Para control de calidad se recomiendo el uso de sueros control para verificar el ensayo en forma manual o en equipos automatizados.

Fósforo:
Valores de Referencia:
Adultos 2.5 -4.8 mg/dL
Niños: 4-7 mg/dL

Procedimiento:
Px: 1.0 mL react + 20 uL Mx
Patrón: 1.0 mL react + 20 u Mx
Blanco: 1.0 mL react.
Mezclar Bien. Incubar 5 minutos a temperatura ambiente.
Anotar las absorvacias. Leer a 340 nm.


Muestras analizadas en el Laboratorio B.

5.94
6.30
5.98
6.06
3.43
5.98
5.94
4.74

--
X= 5.5 mg/dL

Conclusión
Es un leve aumento de la concentración serica de fosfato.
Causas:
Insuficiencia Renal crónica: en vez de haber una excreción va haber retención de este Ion.
Hipoparatiriodismo, toxicidad Vit D: si hay mucha vitamina D va haber poca excreción de fósforo.