miércoles, 2 de julio de 2008

Perfil Lipidico

UNIVERSIDAD DE ORIENTE
NUCLEO BOLIVAR
ESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUD
DEPARTAMENTO DE BIOANALISIS
BIOQUIMICA CLINICA
Perfil Lipidico
Bachiller: Luis Gutiérrez
Profesor: Germán Guzmán
Cuidad Bolívar, junio del 2008

Introducción

El perfil lipídico es un grupo de exámenes de sangre que indican la forma como su cuerpo utiliza, cambia y almacena los lípidos. Los lípidos son grasas que no pueden disolverse en la sangre. Los lípidos se pegan a las proteínas en la sangre recibiendo así el nombre de lipoproteínas. La cantidad de lipoproteínas en su sangre puede cambiar dependiendo de lo que usted come, de una enfermedad o por herencia. Algunos de estos lípidos son el colesterol y los triglicéridos.
El perfil lipídico sirve para saber si usted está en peligro de contraer una enfermedad cardíaca. También sirve para conocer el efecto de las medicinas

No coma ni beba nada excepto agua, 12 horas antes de ser extraída la sangre. Puede ser necesario suspender las medicinas antes del examen. Consulte con su médico para saber si usted debe suspender sus medicinas habituales antes del examen.

Un paramédico le colocará una banda elástica y ancha (torniquete) alrededor de su brazo y la apretará. Su piel será limpiada con alcohol. Una pequeña aguja unida a un tubo de ensayo especial, será colocada en una vena de su brazo o mano. El tubo hace succión para extraer la sangre hacia él. Cuando el tubo se llena, se retiran la banda de caucho, la aguja y el tubo de ensayo. El paramédico presionará con un algodón el sitio en el que estuvo la aguja. Es posible que le pidan que presione el algodón en el sitio por unos minutos para detener la sangre. Le pueden colocar esparadrapo sobre el algodón para sostenerlo en su brazo.

Después del examen. A los 20 o 30 minutos de haber pasado la extracción de la sangre, usted podrá retirar el esparadrapo y el algodón de su brazo. Llame a su medico en ____ días para conocer el resultado del examen. Su médico le explicará lo que el resultado del examen significa para usted.

Acuerdos sobre su cuidado: Usted tiene el derecho de participar en el plan de su cuidado. Para participar en este plan, usted debe aprender acerca de su enfermedad, lesión, cirugía o procedimiento. De esta forma usted y su médico pueden hablar acerca de sus opciones y decidir que tratamiento se usará para su cuidado. Usted siempre tiene el derecho a rechazar su tratamiento.

Determinación de colesterol total
Fundamentos del Método.
Inserto de la Casa Comercial Laboratorios Biogamma C.A.
Colesterol Total.

Para la determinación de colesterol total se utilizan reactivos comerciales que incluyen las enzimas y sustratos necesarios para la cuantificación de todas las formas de colesterol presentes en el suero (Kit comercial de Biogamma C.A. Colesterol Total.
La determinación del colesterol total esta basado en el procedimiento enzimático (descrito por Allan):
Colesterol esterasa

Esteres de colesterol=====Colesterol Libre + Ácidos Grasos
Colesterol oxidasa
Colesterol Total + Oxigeno=====Colest- 4- en -3- one + H2O2
Peroxidasa
Fenol + 4-aminoantipirina + 2 H2O2=====Cromoforo de quinoneimina + 4H2O
Reactivos usados

-Reactivo enzimático. Contiene: 4- aminoantipirina, Fenol, Colesterol Estearasa, Colesterol Oxidasa, Peroxidasa, activadores, estabilizadores y Buffer. Condiciones: refrigerado entre 4-8 ºC.

-Estándar de Colesterol (200 mg %): es una solución de colesterol monometil etilenglicol, y activadores. Condiciones: refrigerado entre 4-8 ºC, o a temperatura ambiente (25 ºC)
Precaución: las soluciones de estándar son venenosas si son absorbidas a través de la piel y muy peligrosa si se inhalan sus vapores. Lave las manos vigorosamente después de su uso.
Muestra.
-Suero recién extraído y no hemolizado. También se pueden usar plasma obtenido con EDTA.

El colesterol en suero o plasma es estable:

-Por 5 día a temperatura ambiente.
-2 semanas refrigeradas
-6 meses si se congela.
Recomendaciones: Un ayuno de 12-14horas antes de la extracción de la muestra, sobre todo si también se le va hacer la determinación de triglicéridos a la misma muestra. Sin no cumplen este requisito no deben usarse para determinar colesterol y HDL-Colesterol.
Limitaciones del Método.

-Niveles de ácido ascórbico tan altos como 10 mg %, No Interfieren en la prueba
-El presente método de Colesterol, á demostrado ser lineal hasta 500 mg/dl. Mas allá de este límite, las muestras deberán diluirse con solución salina (0,85%) y ensayadas nuevamente. El nuevo resultado deberá multiplicarse por el factor de dilución
Procedimiento del método.
Marcar 3 tubos: Tubo 1 para la muestra (M), Tubo 2 para el estándar de referencia (ER) y Tubo 3 para blanco reactivo (BR).
A cada tubo (1, 2 y 3) agregar 1 ml de reactivo de colesterol.
Pipetear 0,010 ml de la muestra y agregar al tubo 1. Tape y mezcle por inversión.
Pipetear 0,010 ml de estándar de colesterol total y agregar al tubo 2. Tape y mezcle por inversión.
Pipetear 0,010 ml de agua destilada y agregar al tubo 3. Tape y mezcle por inversión.
Incubar todos los tubos a 37 ºC por 5 minutos en baño de maría, o 15 minutos a temperatura ambiente.
Después de incubar, mezclar por inversión cada tubo y lea en el espectrofotómetro dentro de los 30 minutos siguientes.
Leer a 500 nm, llevar a 0% abs., con el blanco reactivo. Leer el tubo 1 y 2 y anotar las Absorbancias. (esto dependerá del equipo utilizado, algunos dan las concentraciones del analito en estudio).
Se utilizo un aparato manual (génesis)
Nota: control de calidad se recomienda el uso de sueros controles normales y anormales, comerciales de calidad reconocida.
----------------Muestra------------Estándar-----------Blanco reactivo
Muestra-----0.010ml------------------------------------------------------
Estándar----------------------------0.010ml-------------------------------
Reactivo--------1ml-------------------1ml-----------------1ml-----------
Colesterol

Determinación de HDL-colesterol

Para la determinación del colesterol presente en las principales lipoproteínas que lo contienen como HDL (lipoproteínas de alta densidad) y LDL (lipoproteínas de baja densidad), es necesario:
1, la separación selectiva de la lipoproteína correspondiente con agentes precipitantes.
2, la cuantificación del colesterol presente en dicha lipoproteína como se indicó anteriormente.
Este es un procedimiento de separación únicamente, para determinar los valores de HDL colesterol, se debe utilizar 0.050ml del sobrenadante obtenido por este procedimiento del colesterol total
-Pipetear 0.5ml de la muestra y agregar en un tubo
-Agregar 0.05ml de reactivo precipitante
Entre estos reactivos precipitantes están el ácido fosfotungstico y magnesio que precipitan a las LDL y VLDL (lipoproteínas de muy baja densidad) mientras que las HDL permanecen en solución
-Agitar vigorosamente
-Reposar en el refrigerador por 15 minutos
-Centrifugar por 10 minutos entre 3500-4000rpm
-Y del sobrenadante tomar los 0.050 ml de muestra para determinarle HDL= colesterol
Esquema de trabajo
----------------Muestra------------Estándar-----------Blanco reactivo
Muestra-----0.050ml------------------------------------------------------
Estándar----------------------------0.050ml-------------------------------
Reactivo--------1ml-------------------1ml-----------------1ml-----------
Colesterol
Mezclar e Incubar 5 min a 37ºC (ó 10 min a temperatura ambiente).
Leer la absorbancia a 505 nm.

Determinación de triglicéridos

Para la determinación de triglicéridos en suero se utilizan reactivos comerciales (Kit comercial de CHEMROY) que incluyen las enzimas y sustratos necesarios para la cuantificación por espectrofotometría visible.

Fundamento del método

Para la determinación colorimetrica cuantitativa enzimático de triglicéridos en suero o plasma
Para establecer el diagnostico de hiperlipoproteinemia primaria o secundaria, es muy útil la cuantificación de triglicéridos en conjunto con otros lípidos.
También es útil para dar seguimiento a la diabetes mellitus, nefrosis, obstrucción biliar y varias anormalidades metabólicas que resultan de disturbios endocrinos

Las reacciones que tienen lugar son:

Lipasa
Triglicéridos + H2O=====Glicerol + Ac. Grasos
GK
Glicerol + ATP====Glicerol-3-P + ADP
GPOD
Glicerol-3-P + O2====Dihidroxiacetona + H2O2
POD
H2O2 + p-clorofenol + 4-AP====Quinona + H2O

1. Una lipasa hidroliza los triglicéridos dando glicerol mas ácidos grasos libre.
2. El glicerol formado es sustrato de una glicerol quinasa que en presencia de ATP lo f osforila a glicerol 3P.
3. El glicerol 3P es oxidado a dihidroxiacetona por una glicerol fosfato oxidasa dando también peróxido de hidrógeno.
4. El peróxido de hidrógeno junto con los cromógenos p-clorofenol y 4-AP son sustrato de una peroxidasa para formar una quinona roja cuantificable a 505 nm. La quinona formada es proporcional a la concentración de triglicéridos presente en la muestra.

Reactivo

-Triglicéridos reactivo
-Triglicéridos activador
-Estándar triglicéridos 200 mg/dl
Precauciones

-Uso de diagnostico in Vitro
-Los reactivos y el estándar contienen azida de sodio como conservador

Material requerido

-Espectrofotómetro
-Baño de maria a 37’C
Muestra

-La heparina y EDTA son los anticoagulantes de elección.
-No deben usarse fluoruros ni oxalatos. Separa el suero o el plasma
-Los TG son estables por 10 días a 2-8’C
-No deje las muestra a temperatura ambiente, ya que los fosfolipidos pueden hemolizarse liberando glicerol libre, falsamente aumentados los TG
Sustancias interferentes
-No debe usarse material que contenga glicerina
-Muestras hemolizadas

Procedimiento

Esquema de trabajo
----------------Muestra------------Estándar-----------Blanco reactivo
Muestra-----0.01ml------------------------------------------------------
Estándar----------------------------0.010ml-------------------------------
Reactivo--------1ml-------------------1ml-----------------1ml-----------
Mezclar e Incubar a 37ºC 5 min (ó 10 min a temperatura ambiente). Leer la absorbancia a 505 nm de la Mx y St
Nota: Control de calidad se recomienda el uso de sueros controles normales y anormales, comerciales de calidad reconocida


Datos

Conc ST colest = 200mg/dl
Abs ST colest = 0.153 Abs
Abs Mx colest= 0.095Abs
Conc ST HDL-C= 50mg/dl
Abs ST HDL-C= 0.284 Abs
Abs Mx HDL-C= 0.086 Abs
Abs ST TG= 0.280 Abs
Abs Mx TG= 0.150 Abs

Calculos de Concentraciones:
Trigiceridos
0.57/280 x 200= 112.14 mg/dl

Colesterol
200/0.153 x 0.095= 124.18 mg/dl

HDL- C
50/0.284 x 0.086 x 1.1= 16.6 mg/dl



Perfil lipidico

==========Valor obtenido =========Unidades========Valor de ref.
Colesterol total=== 125 ==============mg/dl =========150-250 mg/dl
Triglicéridos===== 112 =============mg/dl ===========50-140 mg/dl
VLDL-C ======= 11 ==============mg/dl ============16- 36mg/dl
LDL-C ======== 107 =============mg/dl ============83-140mg/dl
HDL-C ======== 17 ============= mg/dl ============39- 43mg/dl

Conclusion

El perfil lipidico obtenido de la paciente anterior de 29 años. Se ontuvo valores dentro de los niveles fiiologicos normales. Por ende se descarta algun tipo de patologia sugestiva a traves de la prueba de perfil lipidico. Tanto el CT, HDL, LDL, VLDL. estan en los valores de Referencia.

Analisis General de Orina

UNIVERSIDAD DE ORIENTENUCLEO BOLIVARESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUDDEPARTAMENTO DE BIOANALISISBIOQUIMICA CLINICA

Analisìs General de Orina
Bachiller: Luis Gutierrez
Profesor: German Guzmán

Cuidad Bolívar, Junio del 2008



Introducción

El análisis rutinario de orina es una medición por métodos físicos y químicos para medir diferentes parámetros químicos y microscópicos para diagnosticar la presencia de infecciones urinarias, enfermedades renales, y otras enfermedades generales que producen metabolitos en la orina.

¿PARA QUÉ SE REALIZA EL ANÁLISIS?

Se utiliza para evaluar la función de los riñones, de las diferentes hormonas que lo regulan, y situaciones de la regulación de líquidos en el cuerpo humano.

El análisis de orina se realiza como estudio rutinario para discriminación del estado de salud, para el diagnóstico precoz de diferentes enfermedades, para el control de la diabetes o enfermedades renales. También para diagnosticar infecciones urinarias o la presencia de enfermedades renales.

PROCEDIMIENTO DE OBTENCIÓN
Se debe de tener un envase limpio, mejor si es estéril.
La mejor hora para tomar una muestra es la primera hora de la mañana, ya que está más concentrada y puede mostrar mejor las posibles irregularidades.
Para recoger la orina se limpiará la cabeza del pene o la vagina con agua y jabón secando con una toalla seca y limpia.
Comenzar a orinar y dejar caer la primera parte de la orina al inodoro, luego poner el envase limpio para recoger unos 50 a 80 cc y separar el envase de la salida de la orina.
Luego se cierra el envase adecuadamente para su transporte y entrega al personal sanitario encargado de la realización del análisis.
El mejor análisis de orina se realiza con una recogida de menos de 15 minutos antes de realizar el mismo.
El exceso de vitamina C tomada por diferentes razones puede interferir en los resultados de un análisis rutinario de orina.
Hay medicamentos que modifican el color de la orina y no debe de ser tomado como una anormalidad, entre ellos están: La cloroquina, el hierro, la levodopa, la nitrofurantoína, la fenotiacina, la fenitoína, la riboflavina y el triamterene.


ANÁLISIS QUÍMICO Y ANÁLISIS MICROSCÓPICO

Análisis químico de la orina

En esta parte del estudio se describe la presencia de:

Interpretación de la apariencia y color de la orina, pueden aparecer diversas variaciones, orina clara, turbia, amarilla clara, marilla oscura, roja, verde, azul,etc...)
Presencia de bilirrubina en orina
Presencia de glucosa en orina
Hemoglobina en orina
Cetonas en orina
Nitritos en orina
Medición del pH
Proteínas en orina
Densidad de la orina
Urobilinógeno en orina
Análisis microscópico de la orina

En esta parte se estudian y dan resultados de:

Presencia de bacterias o otros microorganismos
Cristales
Grasas
Mucosidad
Hematíes
Células tubulares renales
Células epiteliales
Leucocitos en orina

VALORES NORMALES DE LOS PARÁMETROS EN UN ANÁLISIS RUTINARIO

El color de la orina debe de ser desde transparente hasta amarillo oscuro.
La concentración de la orina debe de ser entre 1.006 a 1.030. Puede variar por la hora del día de recogida, cantidad de comida tomada, o el ejercicio realizado.
El pH de la orina debe de estar entre 4,6 y 8,0.
No debe de haber presencia de glucosa, cetonas, ni proteínas.
No debe de haber presencia de hematíes.
No debe de haber hemoglobina.
No debe de haber bilirrubina.
Puede haber trazas de Urobilinógeno en la orina normal.
No debe de haber nitritos.
No debe de haber leucocitos.

VALORACIÓN DE RESULTADOS ANORMALES

Alteraciones en el color y apariencia. La orina turbia puede deberse a ala presencia de pus ó infecciones. La orina con color amarillo oscuro puede deberse a la presencia de urobilinógeno o bilirrubina.La presencia de color rojo sugiere presencia de hematíes o hemoglobina por problemas renales, infecciones urinarias.La infección por pseudomonas puede dar un color verde a ala orina.
Alteraciones de la concentración de la orina. El aumento o disminución exagerados y que no sean debidos a las variables propias de horario de recogida, exceso de comidas o ejercicio, puede deberse a problemas de la función renal.
Alteraciones del pH de la orina. La orina con pH más alcalino (pH> 7,5 ) puede ser mejor para la disminución de la formación de piedras en la vía urinaria, inclusive puede favorecer el efecto de ciertos antibióticos. Si la orina es demasiado ácida ( pH< 5), también disminuye la formación de ciertas piedras del tracto urinario, disminuye la presencia de infecciones. Si está en los extremos puede deberse a muchas enfermedades.La orina ácida tiene tendencia a producir cristales de xantina, cistina, ácido úrico y oxalato cálcico.La orina alcalina se acompaña de tendencia a formar cálculos de carbonato cálcico, fosfato cálcico, y fosfato de magnesio.

Presencia de glucosa en orina. Se puede suponer que si hay glucosa en la orina es que la glucosa está elevada en la sangre, por una diabetes o por otra razón. Suele acompañarse de presencia de cuerpos cetónicos , que aparecen en exceso en la diabetes no controlada.
Presencia de proteínas en la orina. Principalmente es un indicador de problemas renales, como la glomerulonefritis, como la pérdida de proteínas disminuye la presión oncótica se suele acompañar de edemas intersticiales, lo que se llama síndrome nefrótico.

La presencia de cilindros puede ser debido a acúmulo de proteínas o de células.Los cilindros hialinos son proteínas acumuladas y suelen acompañarse a proteinuria. Pueden encontrase cilindros hialinos tras un ejercicio intenso.La presencia de cilindros celulares granulosos son acumulaciones de partículas celulares de desecho de glóbulos blancos y células epiteliales, pueden aparecer tras el ejercicio intenso y en diversas enfermedades renales.

Presencia de sangre (hematíes, hemoglobina) en la orina puede ser indicador de sangrado renal, pero también ocurre tras el ejercicio físico intenso.
Presencia de bilirrubina en orina. Es un indicador de problemas hepáticos o de las vías biliares.
La presencia de nitritos en orina es un indicador de infección urinaria.

Técnica
1. Mezclar bien la orina
2. Colocar 10 ml de orina en un tubo de centrifuga graduado
3. Centrifugar a 1500 r.p.m por 5 min
4. Descartar el sobrenadante dejando en el fondo el sedimento
5. Resuspender el sedimento urinario
6. Colocar una gota con una laminilla cubreobjeto evitando la formación de burbuja
7. Examinar la lamina mientras esta húmeda, primero con 10X, y luego 40X con condensador arriba


Proteinuria

La proteinuria es la presencia de proteína en la orina en cuantía superior a 150 mg en la orina de 24 horas, esta puede ser transitoria, permanente, ortostática, monoclonal o de sobrecarga.
Un examen de albúmina urinaria mide la cantidad de proteína en la orina
Orina de 24 Horas

Blanco Estándar Muestra

Ac picrico 1.5 ml 1.5 ml 1.5 ml
Mezclar
React Alcalino 1.5ml 1.5ml 1.5ml e incubar 37º

Muestra ---- --- 0.2 ml Leer: 510nm

Estándar ---- 0.2 ---

Agua Destilada 0.2 ------ ----





Proteinas

Blanco Muestra

Orina 1 ml 1 ml


Ac. ----- 4ml
Sulfosalicilico

Sol. NaCl 4 ml ----




Proteínas= __Protenias Orina___= ml/24h/min
100

1- Medir el volumen de Orina
2-Se toma 10 ml se centrifuga a 1800 rpm por 5 minutos.
Se lee a 420 nm



Resultados

Análisis general de orina

Examen físico:

Color:=amarillo
Aspecto= claro
Ph=5
Reacción= acida
Densidad= 1.020 g/ml

Examen químico:
Bilirrubina= negativo (-)
Cuerpos cetónicos= negativo (-)
Glucosa= negativo (-)
Proteína= negativo (-)
Sangre= negativo (-)
Nitrito= +

Examen microscópico
Bacterias ausentes
Hematíes= 0- 5xc
Leucocitos= 0-3xc
Células= células epiteliales planas escasas
No se observo cilindros ni cristales.

Conclusión

Se observaron todos los elementos normales en la orina fisiológicamente normal. Este paciente no presenta patologías por lo menos no existen hallazgos a traves de el examen de orina.
Este paciente tiene ausencia de bacterias. Y los valores de leucocitos y bacterias estan en los valores normales.

Prueba a un Stress con Sobrecarga de Glucosa.

UNIVERSIDAD DE ORIENTE
NUCLEO BOLIVAR
ESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUD
DEPARTAMENTO DE BIOANALISIS
BIOQUIMICA CLINICA
Prueba de la tolerancia de la glucosa Curva de la tolerancia a la Glucosa



Bachiller: Luis Gutierrez
Profesor: German Guzmán

Cuidad Bolívar, Junio del 2008

Introducción

La glucosa es el azúcar que el cuerpo utiliza como energía. Las personas que padecen de diabetes no tratada tienen altos niveles de glucosa en la sangre y las pruebas de tolerancia a la glucosa son una de las herramientas para diagnosticarla.

La prueba más común de tolerancia a la glucosa es la oral. La persona no puede comer ni beber nada después de la media noche antes del examen. Para el examen, se le solicita al paciente que se tome un líquido que contiene una cierta cantidad de glucosa. Se toman muestras de sangre antes de hacer esto y de nuevo cada 30 a 60 minutos después beber la solución, hasta por 3 horas.

Los niveles de glucosa en la sangre por encima de los límites normales en los momentos en que se hacen las mediciones se pueden utilizar para diagnosticar diabetes Tipo 2 o diabetes gestacional (altos niveles de glucosa durante el embarazo). También se pueden medir los niveles de insulina, la hormona producida por el páncreas que mueve la glucosa desde el torrente sanguíneo hasta las células.
La prueba intravenosa de tolerancia a la glucosa no se utiliza con frecuencia. En esta prueba, se inyecta la glucosa en una vena durante tres minutos y se miden los niveles de insulina en la sangre antes de administrarla, al igual que en el minuto uno y en el tres después de la inyección. Con este examen se puede predecir la diabetes tipo 1 en algunos pacientes.
Preparación para el examen
Se recomienda comer normalmente durante algunos días antes del examen, pero se debe suspender la ingesta de alimentos y de líquidos durante las últimas 12 horas y tampoco se puede comer nada durante el examen.
Además, la persona le debe consultar al médico si está usando medicamentos que puedan interferir con los resultados del examen.

Lo que se siente durante el examen
Al introducir la aguja para extraer la sangre, algunas personas experimentan algo de dolor, mientras que otras tan sólo sienten una punzada. Después, se puede tener una sensación pulsátil.
Razones por las que se realiza el examen
El examen oral de tolerancia a la glucosa se utiliza para evaluar a las mujeres embarazadas por diabetes gestacional entre las semanas 24 y la 28 de embarazo. Este examen o prueba también se puede utilizar en casos en los que se sospeche la presencia de esta enfermedad, a pesar de tener un resultado normal de glucosa sanguínea en ayunas.

Valores normales

Los valores sanguíneos normales para una prueba de tolerancia a la glucosa oral con 75 gramos, utilizada para detectar diabetes tipo 2 son:
• Ayunas: 60 a 110 mg/dL
• 1 hora: menos de 200 mg/dL
• 2 horas: menos de 140 mg/dL. Entre 140 y 200 se considera que existe deterioro en la tolerancia a la glucosa o prediabetes. Este grupo está en mayor riesgo de desarrollar diabetes. Los niveles por encima de 200 mg/dL indican un diagnóstico de diabetes mellitus.
Los valores sanguíneos normales para una prueba de tolerancia a la glucosa oral con 50 gramos, utilizada para detectar diabetes gestacional son:
• 1 hora: menos de 140 mg/dL.
Los valores sanguíneos normales para una prueba de tolerancia a la glucosa oral con 100 gramos, utilizada para detectar diabetes gestacional son:
• Ayunas: menos de 95 mg/dL
• 1 hora: menos de 180 mg/dL
• 2 horas: menos de 155 mg/dL
• 3 horas: menos de 140 mg/dL
Nota: mg/dL = miligramos por decilitro.
Significado de los resultados anormales
Los valores de glucosa superiores a los niveles normales pueden ser indicio de que la persona tiene diabetes o diabetes gestacional.
Sin embargo, los niveles altos de glucosa pueden estar relacionados con otro problema clínico (por ejemplo, el síndrome de Cushing).
Cuáles son los riesgos
Los riesgos derivados de la extracción de sangre de una vena son, entre otros:
• Sangrado excesivo
• Desmayo o sensación de mareo
• Hematoma (acumulación de sangre debajo de la piel)
• Infección (un riesgo leve cada vez que se presenta ruptura de la piel)
• Múltiples punciones para localizar las venas
Las venas y arterias varían de tamaño de un paciente a otro y de un lado del cuerpo a otro, razón por la cual puede ser más difícil obtener una muestra de sangre de algunas personas que de otras.

Consideraciones especiales

Factores que interfieren:

• Estrés agudo (por ejemplo, por una cirugía o una infección)
• Ejercicio vigoroso

Algunos medicamentos pueden producir intolerancia a la glucosa, como:
• Los diuréticos tiazídicos (por ejemplo, la hidroclorotiazida)
• Los betabloqueadores (por ejemplo, el propanolol)
• Los anticonceptivos orales (pastillas anticonceptivas)
• Los corticosteroides (por ejemplo, la prednisona)
• Ciertos medicamentos psiquiátricos
Antes del examen, se le debe hacer saber al médico si se está tomando cualquiera de estos medicamentos.

Determinación de glicemia y Prueba de tolerancia a la glucosa

La razón fundamental para la determinación de la glicemia es el diagnóstico de una serie de alteraciones metabólicas que comparten el fenotipo de hiperglicemia y se denomina Diabetes mellitus. La otra razón importante para determinar glicemia es el diagnóstico de hipoglicemia, la cual se produce por diversas causas, pero en general si no es bien manejada aumenta las posibilidades de desarrollar Diabetes mellitus.Este método, propuesto por Trinder en 1972, será el empleado en esta práctica parala determinación de glucosa. La cantidad de colorante generada, y por tanto la absorbancia medida a 505 nm, será directamente proporcional a la cantidad de glucosa.


Prueba de la tolerancia de la Glucosa

Los métodos más utilizados más comúnmente para evaluar la tolerancia a una sobrecarga de glucosa pueden ser:1. Pruebas de tolerancia utilizando una dosis única oral de glucosa.2. Pruebas de tolerancia con una dosis intravenosa de glucosa.La prueba más común de tolerancia a la glucosa es la oral. Después de una noche de ayuno, el paciente ingiere una solución que contiene una cantidad conocida de glucosa. Se toma una muestra de sangre basal, antes de que el paciente ingiera la solución de glucosa y de nuevo cada 30 minutos después hasta por 2 ó 3 horas, según la solicitud del médico, para la determinación de glicemia. Además, el paciente no puede comer durante el examen y se recomienda informar al médico acerca del uso de medicamentos que pueden afectar los resultados del examen.Cuando se suministra la glucosa por boca, la absorción desde el tracto gastrointestinal hacia la sangre continúa durante un lapso variable, que depende de la cantidad de glucosa suministrada. La máxima absorción de glucosa se estima en 0,8 g/kg de peso por hora.


La tolerancia a la glucosa suministrada por vía oral, mide el balance entre la velocidad de pasaje de la glucosa al fluido extracelular y su separación por la asimilación celular y la excreción urinaria, si la hubiere.Por tanto, la prueba puede influirse no sólo por aquellos factores vinculados con la utilización de la glucosa, sino también por los que influyen en su absorción.EI ayuno previo debe ser de 8 a 9 horas. La dosis de glucosa utilizada es de 75 g. Por lo general se emplean soluciones preparadas y saborizadas estándar. La solución debe ser fría.Se recoge sangre venosa antes de la ingesta de la glucosa y cada media hora o cada hora durante 3 horas después de la ingesta del azúcar, según la solicitud del médico tratante para la determinación de las glicemias

Utilidad de la glucemia en el diagnostico medico

- Afecciones propias o no del metabolismo de la glucosa- Diagnostico de diabetes mellitas- Diagnostico de hipoglucemias- Deterioro del metabolismo de la glucosa
Preparación de la persona para una prueba de tolerancia
-El paciente no debe fumar debido a la estimulación de la glucosa por la nicotina.-Debe tener un ayuno de 10 a 12 horas antes de la prueba.-Hay muchas drogas que pueden causar interferencia, entre ellas están esteroides, anticonceptivos orales, diuréticos, antihipertensivos, anticonvulsivantes, drogas psicoactivas y algunos antinflamatorios.
Condiciones de la muestra

-Las evaluaciones de glucosa se realizan en suero o plasma-Con tubo seco o de tapa roja.-Se toma por lo menos un volumen de 1 mL (niños 0.5 mL).- Temperatura Ambiente: 72 horas; refrigerado a 4 oC: 7 días; congelado a -20 oC: 2 meses.-Tomar una muestra de suero o plasma recogidos mediante procedimientos estándar. El paciente por vía oral tomar los 75ml de la solución glucosada una vez después de tomarle la muestra basal (0hra), y posterior en cada 30 minto tomar las restantes muestras. El suero o plasma deben separarse de los elementos celulares lo antes posible para evitar la glucolisis. La adición de fluoruro sódico a la muestra de sangre previene la glucólisis.La glucosa en suero o plasma es estable 5 a 7 días a 2-8 ºC; congelado a -20 oC: 2 meses. Los anticoagulantes como la heparina, EDTA, oxalato o fluoruro no interfieren.La recolección para una prueba de tolerancia se hace: Después de tomar muestra de suero en ayunas, administrar una solución de glucosa oral. Posteriormente se extraen muestras de suero a los 30, 60, 90 y 120 minutos. Durante el examen el paciente debe permanecer sentado y no consumir nada después de la administración de la solución de glucosa. La actividad física debe ser minimizada. Pueden presentarse vómito o diarrea después del examen.
Contraindicaciones

-Paciente que no esté en ayunas, paciente bajo condiciones de estrés (después de una cirugía, o infección o con corticosteroides).-Una glucosa en ayunas> de 140 mg/dL en dos ocasiones o una glicemia post-prandial mayor de 200 mg/dL en dos ocasiones en individuos que no están bajo stress, indican una diabetes mellitus, por esta razón está contraindicada la realización de la curva de tolerancia.-La excesiva hormona de crecimiento, las hormonas adrenocorticales y tiroideas, y las catecolaminas pueden disminuir la tolerancia a la glucosa.Interferencias: la hemoglobina (> 3 g/L), la lipemia (trigliceridos >1,25 g/L) y la bilirrubina (10 mg/dL) interfieren.
Consideraciones especiales
Factores que interfieren:-Estrés agudo (por ejemplo, por una cirugía o una infección)-Ejercicio vigoroso-Ansiedad-Enfermedades como hepaticas, hormonales, intestinales…-CigarrilloAlgunos medicamentos pueden producir intolerancia a la glucosa, entre otros:-Los diuréticos-Los betabloqueadores (como el propanolol)-Los anticonceptivos orales-Los corticosteroides (como la prednisona)-Algunos medicamentos psiquiátricos
Fundamento del método

Determinación de glucosa (método glucosa - oxidasa)
La glucosa presente en la muestra origina, según las reacciones, un complejo coloreado que se cuantifica por espectrofotometría.Glucosa + ½ O2 + H2O======Glucosa oxidasa== Glucónico + H2O22 H2O2 + 4 – Aminoantipirina + Fenol Peroxidasa Quinonaimina + 4 H2OEl peróxido de hidrógeno liberado reacciona con un cromógeno (fenol/4-aminoantipirina) por la reacción de Trinder, para dar una quinona que absorbe entre 492 y 550 nm. La intensidad de color producida es directamente proporcional a la concentración de glucosa.Puede analizarse por este método cualquier muestra: suero libre de hemólisis, plasma, líquido cefalorraquídeo, orina, un hidrolizado de muestras de hígado para valorar glucógeno etc.
Reactivos
-Reactivo Trinder: Disolución que contiene todos los reactivos necesarios para la determinación de la glucosa-Disolución patrón de glucosa 0,01
Procedimiento
-Pipetear en tubos de ensayo como se indica en la tabla: tubos marcados como: blanco, estándar y muestras, los reactivos indicados
Reactivos----- Blanco----- Estándar----- Problema--------Estándar----------------------------------- 20μL--------Muestra----------------------20μL-------------------Reactivo--------2 mL----------- 2 mL--------- 2 mL----
Concentración Estándar (glucosa, 100 mg/dL)-Agitar bien e incubar los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente (30-37 ºC)- Ajustar el espectofotómetro a cero de absorbancia (DO) a la longitud de onda de 500 nm y utilizando el tubo blanco, y leer los tubos restantes . Leer la absorbancia (A) del Patrón y de la Muestra a 500 nm frente al Blanco.El color es estable durante al menos 2 horas.

Cálculos
Con los valores de absorbancia (DO) del estándar y de los tubos problema se puede calcular la concentración de glucosa en la muestra.DO problema x concentración estándarConc. problema = XDO estándar= 100 mg/DlConc= Factor de calibración x lectura (Abs)

Valores normales
Suero o plasma: 70 - 116 mg/ dLL.C.R.: 50 - 70 mg/ dLOrina: No contiene, en condiciones fisiológicas normales.Aunque la glucosa puede determinarse por métodos químicos, estos en su mayoría carecen de especificidad y no pueden distinguir la glucosa de otros monosacáridos. Tanto en análisis clínicos como en la industria alimentaria se utilizan métodos enzimáticos para la determinación de glucosa. Así la glucosa oxidasa es una flavoproteina altamente específica que cataliza la oxidación de la glucosa a β-Dgluconolactona, sin que ningún otro azúcar natural reaccione en extensión apreciable.
Valores normales
------------------ADA----------------------------OMS--------------NDDG---------- Tiempo---------------------------------PTGO 75g---------------------------Ohra…………….95mg/dl……………………………...........105mg/dl..………..
1hra…………….180mg/dl…………………….....................190mg/dl.............
2hra…………….155mg/dl……….........…140mg/............165mg/dl..............
3hra…………....140mg/dl……………………………..........145mg/dl….……..

ADA: American diabetes association
OMS: Organización mundial de la salud, consenso europeo
NDDG: Diabetes data group

Resultados

PTGONombre y apellido: Rosangel GrüberEdad: 22 años
Resultados Glucemia ------Unidades0hra==91mg/dl1hra===184 mg/dl2hra===258 mg/dl3hra===142mg/dl


Valores de referencia---------------------------ADA----------------------------NDDG-Ohra………….........................................................….95mg/dl……………………………105mg/dl…………1hra……………........................................................180mg/dl……………………...........190mg/dl..............
2hra…………..........................................................….155mg/dl…………...................…165mg/dl.........
3hra……….........................................................…....140mg/dl……………………………..145mg/dl………....
Fecha: 16/06/08

Conclusion

La PTGO 75g realizada a la paciente Rosangel Grüber fémina de 22a, según los valores de referencia de ADA - NDDG y los resultados obtenidos para la hora cero o basal, antes de ingerir la solución glucosada las concentraciones de glucemias si corresponden, al igual para la 1hra se encuentra dentro de los valores de referencia establecidos por las asociaciones, pero ya para la 3 hora las concentraciones de glucemia superan los valores de referencias de ambas agrupaciones cuya concentración de 258mg/dl es muy alta a la que debiera corresponder para esta hora. Aunque para la ultima determinación la glucemia baja y se ubica dentro de los valores de referencia de la NDDG.

El metabolismo de la glucosa para esta paciente esta en los parámetros normales, debido a que no presenta ninguna anormalidad. Tanto en la determinación basal como a las 3 horas de haber tomado la solucion glucosaza.

Enzima CK-MB Cardiaca.

UNIVERSIDAD DE ORIENTE
NUCLEO BOLIVAR
ESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUD
DEPARTAMENTO DE BIOANALISIS
BIOQUIMICA CLINICA

Perfil Enzimático para la valoración del Infarto Agudo de Miocardio
Determinación de CK.M
Bachiller: Luis Gutiérrez
Profesor: German Guzmán
Cuidad Bolívar, Junio del 2008

Introducción
La creatina quinasa (ATP:creatina N-fosfotransferasa, EC2.7.3.2) es una enzima dimérica compuesta por dos tipos de subunidades monoméricas, M (Muscular) y B (Cerebral). Las subunidades se combinan para formar tres isoenzimas CK distintas, CK-BB (CK-1), CKMB (CK-2) y CK-MM (CK-3). CK-MM es la forma predominante de CK en los músculos esqueléticos. CK-BB se encuentra en el cerebro y en los músculos esqueléticos. CK-MB se encuentra en alta concentración en el miocardio (entre 14 y 42%) y en menor proporción en los músculos esqueléticos. En ausencia de enfermedad, la mayor parte de la actividad de la CK en el suero se debe a la isoforma CK-MM. Los daños en el miocardio, como los presentes en el infarto de miocardio agudo (IMA), tendrán como resultado un aumento de los niveles circulatorios de la isoforma CK-MB. Generalmente los niveles de CK-MB aumentan entre 4 y 6 horas después de la aparición del dolor de pecho, alcanzando un pico entre las 12 y 24 horas y volviendo a los niveles iniciales antes de 48 horas. En los casos en los que existan sospechas de un IMA; se recomienda la determinación de CK-MB, generalmente en el momento del ingreso y 6 horas, 12 horas y 24 horas más tarde.

Fundamento del método
Método UV para la determinación de la isoenzima MB de cretina kinasa en suero o plasma mediante anticuerpos monoclonales anti CK-M
El método se basa en la inhibición específica de las unidades CK- M con anticuerpos monoclonales anti CK- M, los anticuerpos inhiben tanto la isoenzima MM como las subunidades M correspondientes a CK- MB. Las subunidades B se determinan mediante el empleo de un sistema reactivo basado en una técnica analítica optimizada por la IFCC, con N acetilcisteina como activador adicionado de anticuerpos monoclonales anti CK- M.

Reactivos provistos
-Buffer: solución de buffer imidazol, 100 mmol/l, pH 6,7
-Sustratos viales: para determinaciones individuales conteniendo cantidades suficientes una vez reconstituido.
-Suero control: vial conteniendo suero liofilizado.

Instrucciones para su uso
-Buffer: listo para usar.
-Sustrato: agregar 2,5 ml de buffer a un vial de sustrato. Agitar y etiquetar.
-Suero control: pipetear 1 ml de agua destilada y agregar al vial de suero liofilizado. Tapar y esperar 5 minutos para su uso.
Precauciones
-Los reactivos son para uso in Vitro.
-Suero control: debe ser tratado como material infectivo, a pesar de que ha sido analizado para HIV y HBV siendo no reactivo.
Instrucciones de almacenamiento
-Reactivos provistos: estables en refrigerador 2-10º C, hasta la fecha de vencimiento
-Sustrato reconstituido: refrigerado de 2-10º C, es estable 3 días a partir del momento de su reconstitución
-Suero control reconstituido: estable 3 días refrigerado 2-10º C, 2 días a 25º C o 3 meses congelado -20º C. No congelar y descongelar repetidamente.
Muestra
-Suero o plasma
-Si se utiliza plasma se debe utilizar heparina o EDTA como anticoagulante, o el empleo de anticoagulante W de Wiener Lab.
-Interferencia: sueros con hemolisis producen valores falsamente aumentados.
Material requerido
-Espectrofotometro.
-Micropipetas y pipetas.
-Baño de maría.
-Cronómetro.
Condiciones de reacción
-Longitud de onda: 340 nm, 334 o 366 Hg.
-Temperatura de reacción: 25, 30 o 37 ºC.
-Tiempo de reacción: 15 minutos.
Procedimiento
Sustrato reconstituido-------------------------------- 2,5 ml
Pre- incubar por unos minutos.
Muestra---------------------------------------------- 0,10 ml


Cálculos de los resultados
CK- MB (U/L) = Delta D Abs/min* Factor
Medida a 340 nm = CK- MB (U/L) = Delta D Abs/min* 8254
Medida a Hg 334 = CK- MB (U/L) = Delta D Abs/min* 8414
Medida a Hg 366 = CK- MB (U/L) = Delta D Abs/min* 14858
Valores de Referencia
Temperatura: 25 ºC----------------------------- 30 ºC ------------------------- 37 ºC
Valores: 10 U/L--------------------------- 16 U/L------------------------ 25 U/L

Resultados
Nombre y Apellido: Fanny Rodriguez
Edad: 23a

Valores Obtenidos CK-MB -------- 24 a 37º C
La creatina quinasa ( CK ) es una isoenzima presente en el músculo ( CK-M ) y en el cerebro(CK-B), y existe en el suero en forma de dimeros como CK-MM, CK-MB, CK-BB, y macroenzimas. La determinación de CK-MB es bastante específica para la confirmación de daños en el músculo cardíaco, siendo que la CK-BB está prácticamente ausente del suero y la CK-MM es abundante, dado su origen muscular.

Así la CK-MB es clínicamente utilizada para el diagnostico y monitorización de infarto de miocárdico. Y los resultados obtenidos en la dertminacion de CK.MB para la paciente fanny R, fue de 24U/L cuyo valor esta dentro de los valores de referencia (10U/L 37ºc) de CK.MB
La reacción para CK-MB consiste en la determinación directa de la actividad enzimático de la CK-B, después de la inhibición especifica de sus subunidad CK-M , en la CK-MM, i CK-MB. Esta inhibición se consigue a través de la unión de anticuerpos policlonales específicos del reactivo, que bloquean el sitio activo de la enzima, inhibiendo así su actividad.


En algunas ocasiones, debido a la naturaleza de la muestra analizada, y la composición del reactivo, los resultados pueden sufrir interferencias por reacciones inespecíficas con la subunidad CK-B.
Estas interferencias (sueros lipemicos, hemolizados…) generan resultados alterados, y no muestran el mejor comportamiento de la determinación.

Bibliografía
-Inserto CK- MB NAC. Unitest. Monoclonal. Wiener Lab 2000. Rosario- Argentina

Espermiograma

UNIVERSIDAD DE ORIENTE
NUCLEO BOLIVAR
ESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUD
DEPARTAMENTO DE BIOANALISIS
BIOQUIMICA CLINICA


Análisis del semen“Espermiograma”

Bachiller: Luis Gutierrez

Profesor: Germán Guzmán

Cuidad Bolívar, junio del 2008


Introducción

El espermiograma es el estudio de la muestra seminal. Es el estudio más importante para evaluar la fertilidad masculina. Se realiza macroscópica y microscópicamente. Se analizan parámetros como el pH, el volumen, la licuefacción, la viscosidad, el recuento, la motilidad, la viabilidad y la morfología. Además se realiza un estudio de capacitación, que nos va a permitir saber el número de espermatozoides que se recuperan tras procesar la muestra.

Los parámetros que se estudian y sus valores de referencia son los siguientes:

pH: el pH debe estar entre 7.2 y 8.1, aunque no existe evidencia de que un valor superior a 8.1 sea negativo. Por el contrario, valores inferiores pueden indicar una infección genital.

Volumen: el volumen debe ser mayor de 2 ml. Si una muestra presenta menos de 2 ml se denomina hipospermia. Un volumen inferior podría indicar una obstrucción causada por una infección genital, alteración congénita de los vasos deferentes, o eyaculación retrógrada.

Licuefacción: al ser recogida la muestra esta presenta un estado de coagulación, y necesita licuarse para proceder a su estudio. La licuefacción se da tras 20-30 minutos. Si no se produce puede indicar algún tipo de disfunción a nivel prostático.

Viscosidad: El semen una vez licuado debe ser ligeramente más viscoso que el agua. Cuando la muestra es altamente viscosa, puede ser debido a una disfunción prostática, eyaculación frecuente, y/o a un estado psicológico del paciente. Este aumento de viscosidad no supone una causa directa de infertilidad, pero puede afectar a las posteriores evaluaciones del espermiograma como su concentración y motilidad espermática.

Recuento espermático: los valores normales deben estar por encima de 20 millones/ml. Si el valor se encuentra por debajo la muestra se clasifica según el número de espermatozoides de la siguiente manera:

Oligozoospermia moderada: entre 10 y 20 millones/ml
Oligozoopermia severa: entre 0.1 y 10 millones/ml
Criptozoospermia: menos de 0.1 millones/ml
Azoospermia: no existen espermatozoides en el eyaculado
Motilidad: la motilidad se basa en la observación de la muestra a través del microscopio, y ésta es de diferentes tipos:

Clase a) Excelente. Desplazamientos rápidos describiendo trayectorias rectilineas. (También clasificado como "+++")
Clase b) Moderada. Velocidad progresiva moderada con trayectorias rectilineas. (También clasificado como "++")
Clase c) Velocidad no progresiva con trayectorias poco o nada rectilineas. (También clasificado como "++") o movimiento del espermatozoide sin apenas desplazamiento. (También clasificado como "+")
Clase d) Ausencia de motilidad
Viabilidad o Vitalidad: la viabilidad nos permite saber el número de espermatozoides vivos, aunque estos no se muevan. Se utiliza una tinción que tiñe los espermatozoides muertos. Cuando el valor es inferior al 60%, se habla de una muestra necrozoospérmica..

Morfología: Es el estudio de la forma del espermatozoide. Se realiza utilizando los criterios estrictos de Tygerberg, en los cuales una muestra se considera morfológicamente normal cuando los el número de espermatozoides normales es igual o superior al 4%.

Capacitación Espermática

Es el proceso en el que se separa el líquido seminal de los espermatozoides. Es un proceso que ocurre "in vivo". En el laboratorio esta técnica nos va a permitir separar el líquido seminal y también los espermatozoides de buena calidad de los de mala calidad. Es un proceso de selección. Así vamos a poder ver el número y motilidad de los espermatozoides que se recuperan, y esto nos va a orientar, en caso necesario, hacia la técnica de Reproducción Asistida a utilizar.
Análisis del semen Espermiograma Se indica en casos -Sospecha de esterilidad-Verificar eficacia de la vasectomía-Cuando se alega esterilidad para negar paternidad-Casos de medicina legal

Los marcadores utilizados para evaluar la calidad del semen en el espermograma clásico, son fundamentalmente las siguientes-Conteo de espermatozoides por mililitro (ml)-Conteo total de espermatozoides-Movilidad-Viabilidad-Morfología normal de los espermatozoides

Tipos de toma de muestra

-Coitus interruptus (no recomendada)-MasturbaciónEl tomar la muestra mediante el coitus interruptus tiene como desventaja la contaminación vaginal, y quizás una perdida de la totalidad de la muestra.Si el hombre utiliza preservativo de látex con espermicidas este eliminara los espermatozoides y se obtendrá un volumen disminuido.En el centro clínico debería existir un área privada y tranquila destinada para los pacientes que requieran la realización de este estudio.

Precauciones de la toma de muestra

-Utilizar un envase de plástico-estéril, al momento del paciente tomarse la muestra, debe frotar el envase con las manos, con la finalidad de que tenga este un temperatura parecida a la corporal, ya que un cambio brusco de temperatura disminuye la movilidad de los espermatozoides-Si la muestra es recolectada por masturbación o cualquiera otra técnica se debe tratar de no tener perdida del material, y si esto ocurre reportar que hubo perdida.

Condiciones para la realización de un espermograma

-Tener entre 3 a 5 días de abstinencia sexual-Tener abstinencia alcohólica-No tener fiebre, gripe, ni ningún proceso viral o bacteriano-Se debe realizar higiene de sus genitales con agua y jabón, y secarse bien con una toalla sin usar, antes de proceder a la obtención de la muestra.-Tomarse la muestra por la técnica indicada-Utilizar un envase de plástico-estéril-Obtener la muestra completa, sin descartar ninguna porción con la técnica adecuada. Evitar que entre agua al envase de la muestra-Entregar la muestra en el laboratorio en un no mayor a 1 hora después de haber sido tomada.-Indicar si hubo pérdida de alguna fracción de la muestra. Recordar que la primera fracción es la más concentrada.

Transporte de la muestra

-Debe hacerse de manera inmediata, no más de media hora después de haber tomado la muestraRecepción y conservación de la muestra en el laboratorio-Rotular la muestra perfectamente-Manejar la muestra con precaución, ya que se pudiera de muestras que tengan HIV, Hepatitis B, Virus herpes… y se puede transmitir a través de ella.-Mantener a temperatura ambiente la muestra

Análisis del semen: Consta de 3 partes

-Examen físico o macroscopico comprende: aspecto, color, ph, filancia, medición del volumen seminal-Examen microscopio comprende: motilidad, viabilidad, recuento total de espermatozoides-Examen marcadores químico: para la función de la próstata, vesícula seminal, epidídimo.

Examen físico


-Aspecto: este va a depender si es antes o después de la licuefacción (es la disolución de los grumos o coágulos por acción enzimático, esta ocurre hasta los 30min después de haberse tomado la muestra). Debe ser completa dentro de los 60minAntes de la licuefacción. El semen recién eyaculadoAspecto del semen heterogéneoDespués de la licuefacciónAspecto homogéneo- opalescenteLa opalescencia es proporcional a la concentración de espermatozoides-Color: va desde Blanco grisáceo a blanco amarillento. Esto va depender de la concentración de espermatozoides presentes.Según el periodo de abstinencia del paciente, si es mas de un mes el color ligeramente acre, color pardo-marrón o si contiene hematíes (hematospermia). Esto se debe a la cantidad de FlavonoidesAdemás este puede variar si el paciente presenta en ese momento alguna inflamación, infección, u otro cuadro patológico-ph: Se mide con papel de ph al colocar una gota de semen y al cabo de 30seg se compara el color con la cartilla de calibración para determinar el ph de la muestra el cual debe caer dentro del rango de referencia, el laboratorio debe usar un papel de un rango adecuado (6.4-8.0 6.1-10.0). El ph del semen varía normalmente de 7.2-8.Debe ser medido dentro de los 60min después de la eyaculación.Pocos son los trastornos capaces de alterarlo. Aunque un ph mayor de 10 puede considerarse signo de infección seminal saciado a otros síntomas, y un ph <7.2, se observa cuando existe un déficit de la función de las vesículas seminales (síndrome de ausencia funcional de los conductos eyaculadores)

-Filancia (viscosidad): esta se mide después de la licuefacción, y se puede realizar de dos maneras. 1. Aspirando la muestra con una pipeta y dejándola caer luego gota a gota. Normalmente las gotas formadas son bien definidas y pequeñas. 2. utilizando una varilla de vidrio en la muestra y observando la longitud del filamento que se forma al retirarla. La longitud del filamento formado no debe exceder los 2cm No se conoce la causa por la cual algunos pacientes se observa una consistencia aumentada o la presencia de bridas mucosas. (Algunos autores sugieren que podría ser un signo de infecciones del aparato urogenital, prostatitis). El aumento de esta puede interferir en la medición de la concentración y la movilidad de los espermatozoides.


-Volumen seminal: se mide en recipientes graduados de base cónica como los tubos de centrifuga graduado o por aspiración completa de la muestra con una pipeta graduada. Se considera un volumen seminal normal de 2ml o más. Un volumen menor (hipospermia) <1.5ml>6ml puede ser signo de infección de las vías seminales (particularmente de las vesículas seminales). El volumen total de eyaculado se calcula con una operación aritmética de multiplicar la concentración de espermatozoides/ml por el volumen eyaculado. Se considera normal más de 40 millones de espermatozoides por eyaculado

Examen microscópico

-Motilidad de los espermatozoides: para una buena evaluación de la movilidad de los espermatozoides, se debe realizar antes de las dos primeras horas de haberse producid el eyaculado. Ya que a medida que pasa el tiempo se hallara un menor porcentaje de espermatozoides móviles.La Organización Mundial de la Salud (OMS), recomienda un sistema simple de medir la movilidad, se clasifica en 4 categorías:a. Movilidad progresiva rápida (%)b. Movilidad progresiva lenta, lineal no (%)c. Movilidad no progresiva (%)d. Inmovilidad (espermatozoides inmóviles)Se considera normal cuando: el 50% de los espermatozoides o mas presentan una movilidad progresiva rápida (categoría a+b), mas del 25% mas de los espermatozoides presentan movilidad progresiva rápida lineal (categoría a).Se coloca una gota de la muestra de semen sobre una lámina portaobjeto (limpia, libre de grasa), y se cubre con una cubreobjeto. Se espera un tiempo de 1min antes de observarla al microscopio. Se observa con el objetivo de 40X. Luego se procede a contar los espermatozoides presentes hasta completar un total de 100espermatozoides por campo observado.Una disminución de la movilidad (astenozoospermia) puede ser hallazgo de daño global de la espermatogenesis (este hallazgo puede ser aislado o acompañado de alteraciones en la concentración y morfología normal de los espermatozoides). El encontrar este hallazgo en un análisis seminal no es un marcador diagnostico y algunos casos tampoco de pronostico, por lo que se requiere la realización de otras pruebas complementarias para diagnosticar alguna alteración.-Viabilidad de los espermatozoides: cuando en un espermograma se comprueba aumento del % de la disminución de la movilidad de los espermatozoides (astenozoospermia), es necesario medir la viabilidad de espermatozoides vivos, esto permite precisar si la baja movilidad se debe, a que existe un gran número de espermatozoides muertos.Un hallazgo de astenozoospermia con un porcentaje normal de espermatozoides vivos sugiere la existencia de anomalías estructurales de la cola de los espermatozoides, cuyo diagnostico de certeza solo puede hacerse por microscopia electrónica. Lo que nos servirá como prueba pronostica de una patología. Como existe diferencias entre el valor normal de espermatozoides vivos en un espermograma dado por la OMS en sus diferentes ediciones, cada laboratorio debe establecer sus valores normales. Pero se considera como valor de referencia mayor del 75% de espermatozoides vivos.Para diferenciar de los espermatozoides realmente muertos de los inmóviles vivosSe someten los espermatozoides a alguna tinción supravital o se evalúa su capacidad osmorreguladora cuando se les expone a condiciones hipoosmóticas.-Tinción supravital: se basan en el principio de que las células muertas cuyas membranas plasmáticas están dañadas, permiten la entrada del colorante. Existen dos de estos métodos: el uso de eosina sola en preparados frescos o una combinación de eosina y nigrosina en preparados secos. No es reversible*Tinción con eosina 5%1. Agregar una gota de semen fresco en un portaobjeto, con una gota de solución de eosina al 5% (mezclar), y cubrirse con un cubreobjeto.2. Al cabo de 1 ò 2 minutos obsérvese el preparado con 40X con luz intensa.3. Cuéntense los espermatozoides no teñidos (vivos) y los teñidos (muertos). Igualmente se debe contar 100 o mas espermatozoides.Se reporta el porcentaje de espermatozoides vivos y muertos*test hipoosmotico: evalúa la integridad anatomo-funcional de la membrana plasmática del espermatozoide, que de encontrarse intacta, incorpora agua del medio extracelular al colocar el espermatozoide en un medio hipoosmotico. Es reversibleMorfología de los espermatozoides: se han empleado muchas técnicas para el estudio de la morfología de los espermatozoides, las cuales utilizan en su mayoría extendidos teñidos con técnicas como giemsa, papanicolaou modificado para espermatozoides, la tinción de shorr, entre otras técnicas. Según la OMS se considera como valor de referencia un 30% o más de las formas normales de los espermatozoides.Debido a que en muchos espermatozoides anormales se observan múltiples defectos, no hay un acuerdo sobre si el resultado de la morfología debe expresarse en forma global (total de espermatozoides normales y anormales) o si es mas conveniente especificar el % de ellos con anomalías de la cabeza (defecto de tamaño y/o forma), pieza intermedia (defecto de cuello) y en la cola.La teratozoospermia puede observarse en un gran numero de trastornos como: varicocele, sepsis seminal, estresa y la exposición a agentes externos nocivos…Para comprobar las anomalías existente en los espermatozoides de un paciente debe de existir alrededor del 95% de sus espermatozoides. Raras ocasiones se encuentran anomalías morfológicas que invariablemente den lugar a esterilidad, entre estas están: los espermatozoides de cabeza redonda, los de cabeza en forma de pera y los de cabeza en forma de alfiler.Recuento de los espermatozoides: para realizar el recuento se utiliza la cámara de Neubauer, y se realiza en el cuadrante central del hematimetro, el mismo que es utilizado para contar plaquetas y hematíes. Se cuentan en ambos retículos y se calcula un promedio. La diferencia entre ambos recuentos debe ser menor al 10%.El conteo total de espermatozoides suele reflejar el estado de la espermatogénesis. También muestra la relación directa con el volumen eyaculado y con el previo período de abstinencia sexual.Según el grado de concentración observada, se prepara diluciones de la muestra. Las cuales pueden ser 1/10, 1/20, 1/50.El diluyente a utilizar contiene NaHCO3, formalina al 35%(v/v) y agua destilada. Para determinar la concentración en millones/ml del semen, se divide el promedio del recuento por el factor de corrección que va a depender del tipo de dilución usada y del número de cuadrados que fueron contados.

Dilución (Semen + diluyente) -------------------- Numero de cuadrado contados----------------------------------------------------------------------- 25 -------10-------51+9----------------------------------------------------------------------10--------4--------21+19-----------------------------------------------------------------------5--------2----------11+49-----------------------------------------------------------------------2--------0.8------0.4

Otras células en el semenLeucocitos: se considera que un eyaculado normal debe haber menos de 1.000.000/ml. La presencia de cantidades mayores de leucocitos (leucocitospermia), se pudiera sospechar de una infecciones, pero la ausencia de ellos tampoco nos asegura que no existe una sepsis de las vías seminales. El número de células se calcula así= numero de células por contaje total de espermatozoides/100Células epiteliales: principalmente de la uretra, células espermatogénicas inmaduras de distintos tipos. La concentración de células debe medirse y dar su resultado en porcentaje. Se considera normal que el semen eyaculado no contenga más del 5% de estas células. La presencia de células espermatogénicas inmaduras en el eyaculado es un signo de irritación del epitelio germinal si se producen eyaculaciones repetidas. Su presencia requiere de otras pruebas para dar un diagnosticoConsideraciones de un semen normal

-Mas de 20.000.000 de espermatozoides/ml-Mas de 50% de los espermatozoides móviles (a+b), o mas del 25% categoría a-Mas del 30% de los espermatozoides con forma y tamaño normal

Nomenclatura de algunas variables del semen

-Aspermia: ausencia de semen. No hay eyaculado-Azoospermia: ausencia de espermatozoides en el eyaculado-Astenozoospermia: Disminución de la movilidad de los espermatozoides. Menos del 50% de espermatozoides con progresión lineal(a+b), o menos del 25% con progresión lineal rápida(a)-Hipospermia: Volúmen seminal menor de 2ml-Hematospermia: color pardo de la muestra de semen-Necrozoospermia: concentración, morfología de los espermatozoides normal y aumento de % de espermatozoides muertos.-Oligoospermia: numero de espermatozoides inferior a 20 millones/ml-Oligoastenoteratozoospermia: número de espermatozoides inferior a 20 millones/ml, disminución de la movilidad de los espermatozoides, aumento de formas anormales de los espermatozoides.-Teratozoospermia: aumento de formas anormales de los espermatozoides (más de un 30% o menos de un 50% de formas anormales)-leucocitospermia: presencia de 1.000.000 de leucocitos/ml-Normozoospermia: eyaculado normal. Concentración de espermatozoides 20.000.000/ml

Estudios que se le hacen al semen con el propósito de diagnosticar a presencia de algún problema de fertilidad

-Espermatograma-Espermocultivo-Recuperación de espermatozoides motiles-Prueba de viabilidad-Prueba de integridad del acrosoma-Determinación de anticuerpos antiespermaticos

Resultados:


Análisis de semenPaciente: No ObtenidoEdad: 27añoshora de toma de muestra= 8.30am



Examen físico:-Aspecto= después de la licuefacción(35min) aspecto homogéneo-Color= blanco amarillento- Ph= 8- Viscosidad= mas de 2cm- Volumen seminal = 5ml- Volumen minino de eyaculado= 80.000.000 de espermatozoides/ml


Examen microscópicoMotilidad= categoría aMas del 65% de los espermatozoides tienen movilidad progresiva rápidaViabilidad= mas del 75% de los espermatozoides están vivos móvilesMorfología= mas del 50% de los espermatozoides de formas normalesRecuento Total de espermatozoides=12 400.000espermatozoides/mlOtras células:-Leucocitos= 620.000 leucocitos/mlPara el rexcuento de espermatozoides se realizo una dilucion 1/10



Bibliografía


- Guía de laboratorio de bioquímica clínica. Universidad de oriente, Núcleo Bolívar
- www.wikipedia.org