Espermiograma

UNIVERSIDAD DE ORIENTE
NUCLEO BOLIVAR
ESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUD
DEPARTAMENTO DE BIOANALISIS
BIOQUIMICA CLINICA

Análisis del semen“Espermiograma”

Bachiller: Luis Gutierrez

Profesor: Germán Guzmán

Cuidad Bolívar, junio del 2008

Introducción

El espermiograma es el estudio de la muestra seminal. Es el estudio más importante para evaluar la fertilidad masculina. Se realiza macroscópica y microscópicamente. Se analizan parámetros como el pH, el volumen, la licuefacción, la viscosidad, el recuento, la motilidad, la viabilidad y la morfología. Además se realiza un estudio de capacitación, que nos va a permitir saber el número de espermatozoides que se recuperan tras procesar la muestra.

Los parámetros que se estudian y sus valores de referencia son los siguientes:

pH: el pH debe estar entre 7.2 y 8.1, aunque no existe evidencia de que un valor superior a 8.1 sea negativo. Por el contrario, valores inferiores pueden indicar una infección genital.

Volumen: el volumen debe ser mayor de 2 ml. Si una muestra presenta menos de 2 ml se denomina hipospermia. Un volumen inferior podría indicar una obstrucción causada por una infección genital, alteración congénita de los vasos deferentes, o eyaculación retrógrada.

Licuefacción: al ser recogida la muestra esta presenta un estado de coagulación, y necesita licuarse para proceder a su estudio. La licuefacción se da tras 20-30 minutos. Si no se produce puede indicar algún tipo de disfunción a nivel prostático.

Viscosidad: El semen una vez licuado debe ser ligeramente más viscoso que el agua. Cuando la muestra es altamente viscosa, puede ser debido a una disfunción prostática, eyaculación frecuente, y/o a un estado psicológico del paciente. Este aumento de viscosidad no supone una causa directa de infertilidad, pero puede afectar a las posteriores evaluaciones del espermiograma como su concentración y motilidad espermática.

Recuento espermático: los valores normales deben estar por encima de 20 millones/ml. Si el valor se encuentra por debajo la muestra se clasifica según el número de espermatozoides de la siguiente manera:

Oligozoospermia moderada: entre 10 y 20 millones/ml
Oligozoopermia severa: entre 0.1 y 10 millones/ml
Criptozoospermia: menos de 0.1 millones/ml
Azoospermia: no existen espermatozoides en el eyaculado
Motilidad: la motilidad se basa en la observación de la muestra a través del microscopio, y ésta es de diferentes tipos:

Clase a) Excelente. Desplazamientos rápidos describiendo trayectorias rectilineas. (También clasificado como "+++")
Clase b) Moderada. Velocidad progresiva moderada con trayectorias rectilineas. (También clasificado como "++")
Clase c) Velocidad no progresiva con trayectorias poco o nada rectilineas. (También clasificado como "++") o movimiento del espermatozoide sin apenas desplazamiento. (También clasificado como "+")
Clase d) Ausencia de motilidad
Viabilidad o Vitalidad: la viabilidad nos permite saber el número de espermatozoides vivos, aunque estos no se muevan. Se utiliza una tinción que tiñe los espermatozoides muertos. Cuando el valor es inferior al 60%, se habla de una muestra necrozoospérmica..

Morfología: Es el estudio de la forma del espermatozoide. Se realiza utilizando los criterios estrictos de Tygerberg, en los cuales una muestra se considera morfológicamente normal cuando los el número de espermatozoides normales es igual o superior al 4%.

Capacitación Espermática

Es el proceso en el que se separa el líquido seminal de los espermatozoides. Es un proceso que ocurre "in vivo". En el laboratorio esta técnica nos va a permitir separar el líquido seminal y también los espermatozoides de buena calidad de los de mala calidad. Es un proceso de selección. Así vamos a poder ver el número y motilidad de los espermatozoides que se recuperan, y esto nos va a orientar, en caso necesario, hacia la técnica de Reproducción Asistida a utilizar.
Análisis del semen Espermiograma Se indica en casos -Sospecha de esterilidad-Verificar eficacia de la vasectomía-Cuando se alega esterilidad para negar paternidad-Casos de medicina legal

Los marcadores utilizados para evaluar la calidad del semen en el espermograma clásico, son fundamentalmente las siguientes-Conteo de espermatozoides por mililitro (ml)-Conteo total de espermatozoides-Movilidad-Viabilidad-Morfología normal de los espermatozoides

Tipos de toma de muestra

-Coitus interruptus (no recomendada)-MasturbaciónEl tomar la muestra mediante el coitus interruptus tiene como desventaja la contaminación vaginal, y quizás una perdida de la totalidad de la muestra.Si el hombre utiliza preservativo de látex con espermicidas este eliminara los espermatozoides y se obtendrá un volumen disminuido.En el centro clínico debería existir un área privada y tranquila destinada para los pacientes que requieran la realización de este estudio.

Precauciones de la toma de muestra

-Utilizar un envase de plástico-estéril, al momento del paciente tomarse la muestra, debe frotar el envase con las manos, con la finalidad de que tenga este un temperatura parecida a la corporal, ya que un cambio brusco de temperatura disminuye la movilidad de los espermatozoides-Si la muestra es recolectada por masturbación o cualquiera otra técnica se debe tratar de no tener perdida del material, y si esto ocurre reportar que hubo perdida.

Condiciones para la realización de un espermograma

-Tener entre 3 a 5 días de abstinencia sexual-Tener abstinencia alcohólica-No tener fiebre, gripe, ni ningún proceso viral o bacteriano-Se debe realizar higiene de sus genitales con agua y jabón, y secarse bien con una toalla sin usar, antes de proceder a la obtención de la muestra.-Tomarse la muestra por la técnica indicada-Utilizar un envase de plástico-estéril-Obtener la muestra completa, sin descartar ninguna porción con la técnica adecuada. Evitar que entre agua al envase de la muestra-Entregar la muestra en el laboratorio en un no mayor a 1 hora después de haber sido tomada.-Indicar si hubo pérdida de alguna fracción de la muestra. Recordar que la primera fracción es la más concentrada.

Transporte de la muestra

-Debe hacerse de manera inmediata, no más de media hora después de haber tomado la muestraRecepción y conservación de la muestra en el laboratorio-Rotular la muestra perfectamente-Manejar la muestra con precaución, ya que se pudiera de muestras que tengan HIV, Hepatitis B, Virus herpes… y se puede transmitir a través de ella.-Mantener a temperatura ambiente la muestra

Análisis del semen: Consta de 3 partes

-Examen físico o macroscopico comprende: aspecto, color, ph, filancia, medición del volumen seminal-Examen microscopio comprende: motilidad, viabilidad, recuento total de espermatozoides-Examen marcadores químico: para la función de la próstata, vesícula seminal, epidídimo.

Examen físico


-Aspecto: este va a depender si es antes o después de la licuefacción (es la disolución de los grumos o coágulos por acción enzimático, esta ocurre hasta los 30min después de haberse tomado la muestra). Debe ser completa dentro de los 60minAntes de la licuefacción. El semen recién eyaculadoAspecto del semen heterogéneoDespués de la licuefacciónAspecto homogéneo- opalescenteLa opalescencia es proporcional a la concentración de espermatozoides-Color: va desde Blanco grisáceo a blanco amarillento. Esto va depender de la concentración de espermatozoides presentes.Según el periodo de abstinencia del paciente, si es mas de un mes el color ligeramente acre, color pardo-marrón o si contiene hematíes (hematospermia). Esto se debe a la cantidad de FlavonoidesAdemás este puede variar si el paciente presenta en ese momento alguna inflamación, infección, u otro cuadro patológico-ph: Se mide con papel de ph al colocar una gota de semen y al cabo de 30seg se compara el color con la cartilla de calibración para determinar el ph de la muestra el cual debe caer dentro del rango de referencia, el laboratorio debe usar un papel de un rango adecuado (6.4-8.0 6.1-10.0). El ph del semen varía normalmente de 7.2-8.Debe ser medido dentro de los 60min después de la eyaculación.Pocos son los trastornos capaces de alterarlo. Aunque un ph mayor de 10 puede considerarse signo de infección seminal saciado a otros síntomas, y un ph <7.2, se observa cuando existe un déficit de la función de las vesículas seminales (síndrome de ausencia funcional de los conductos eyaculadores)

-Filancia (viscosidad): esta se mide después de la licuefacción, y se puede realizar de dos maneras. 1. Aspirando la muestra con una pipeta y dejándola caer luego gota a gota. Normalmente las gotas formadas son bien definidas y pequeñas. 2. utilizando una varilla de vidrio en la muestra y observando la longitud del filamento que se forma al retirarla. La longitud del filamento formado no debe exceder los 2cm No se conoce la causa por la cual algunos pacientes se observa una consistencia aumentada o la presencia de bridas mucosas. (Algunos autores sugieren que podría ser un signo de infecciones del aparato urogenital, prostatitis). El aumento de esta puede interferir en la medición de la concentración y la movilidad de los espermatozoides.


-Volumen seminal: se mide en recipientes graduados de base cónica como los tubos de centrifuga graduado o por aspiración completa de la muestra con una pipeta graduada. Se considera un volumen seminal normal de 2ml o más. Un volumen menor (hipospermia) <1.5ml>6ml puede ser signo de infección de las vías seminales (particularmente de las vesículas seminales). El volumen total de eyaculado se calcula con una operación aritmética de multiplicar la concentración de espermatozoides/ml por el volumen eyaculado. Se considera normal más de 40 millones de espermatozoides por eyaculado

Examen microscópico

-Motilidad de los espermatozoides: para una buena evaluación de la movilidad de los espermatozoides, se debe realizar antes de las dos primeras horas de haberse producid el eyaculado. Ya que a medida que pasa el tiempo se hallara un menor porcentaje de espermatozoides móviles.La Organización Mundial de la Salud (OMS), recomienda un sistema simple de medir la movilidad, se clasifica en 4 categorías:a. Movilidad progresiva rápida (%)b. Movilidad progresiva lenta, lineal no (%)c. Movilidad no progresiva (%)d. Inmovilidad (espermatozoides inmóviles)Se considera normal cuando: el 50% de los espermatozoides o mas presentan una movilidad progresiva rápida (categoría a+b), mas del 25% mas de los espermatozoides presentan movilidad progresiva rápida lineal (categoría a).Se coloca una gota de la muestra de semen sobre una lámina portaobjeto (limpia, libre de grasa), y se cubre con una cubreobjeto. Se espera un tiempo de 1min antes de observarla al microscopio. Se observa con el objetivo de 40X. Luego se procede a contar los espermatozoides presentes hasta completar un total de 100espermatozoides por campo observado.Una disminución de la movilidad (astenozoospermia) puede ser hallazgo de daño global de la espermatogenesis (este hallazgo puede ser aislado o acompañado de alteraciones en la concentración y morfología normal de los espermatozoides). El encontrar este hallazgo en un análisis seminal no es un marcador diagnostico y algunos casos tampoco de pronostico, por lo que se requiere la realización de otras pruebas complementarias para diagnosticar alguna alteración.-Viabilidad de los espermatozoides: cuando en un espermograma se comprueba aumento del % de la disminución de la movilidad de los espermatozoides (astenozoospermia), es necesario medir la viabilidad de espermatozoides vivos, esto permite precisar si la baja movilidad se debe, a que existe un gran número de espermatozoides muertos.Un hallazgo de astenozoospermia con un porcentaje normal de espermatozoides vivos sugiere la existencia de anomalías estructurales de la cola de los espermatozoides, cuyo diagnostico de certeza solo puede hacerse por microscopia electrónica. Lo que nos servirá como prueba pronostica de una patología. Como existe diferencias entre el valor normal de espermatozoides vivos en un espermograma dado por la OMS en sus diferentes ediciones, cada laboratorio debe establecer sus valores normales. Pero se considera como valor de referencia mayor del 75% de espermatozoides vivos.Para diferenciar de los espermatozoides realmente muertos de los inmóviles vivosSe someten los espermatozoides a alguna tinción supravital o se evalúa su capacidad osmorreguladora cuando se les expone a condiciones hipoosmóticas.-Tinción supravital: se basan en el principio de que las células muertas cuyas membranas plasmáticas están dañadas, permiten la entrada del colorante. Existen dos de estos métodos: el uso de eosina sola en preparados frescos o una combinación de eosina y nigrosina en preparados secos. No es reversible*Tinción con eosina 5%1. Agregar una gota de semen fresco en un portaobjeto, con una gota de solución de eosina al 5% (mezclar), y cubrirse con un cubreobjeto.2. Al cabo de 1 ò 2 minutos obsérvese el preparado con 40X con luz intensa.3. Cuéntense los espermatozoides no teñidos (vivos) y los teñidos (muertos). Igualmente se debe contar 100 o mas espermatozoides.Se reporta el porcentaje de espermatozoides vivos y muertos*test hipoosmotico: evalúa la integridad anatomo-funcional de la membrana plasmática del espermatozoide, que de encontrarse intacta, incorpora agua del medio extracelular al colocar el espermatozoide en un medio hipoosmotico. Es reversibleMorfología de los espermatozoides: se han empleado muchas técnicas para el estudio de la morfología de los espermatozoides, las cuales utilizan en su mayoría extendidos teñidos con técnicas como giemsa, papanicolaou modificado para espermatozoides, la tinción de shorr, entre otras técnicas. Según la OMS se considera como valor de referencia un 30% o más de las formas normales de los espermatozoides.Debido a que en muchos espermatozoides anormales se observan múltiples defectos, no hay un acuerdo sobre si el resultado de la morfología debe expresarse en forma global (total de espermatozoides normales y anormales) o si es mas conveniente especificar el % de ellos con anomalías de la cabeza (defecto de tamaño y/o forma), pieza intermedia (defecto de cuello) y en la cola.La teratozoospermia puede observarse en un gran numero de trastornos como: varicocele, sepsis seminal, estresa y la exposición a agentes externos nocivos…Para comprobar las anomalías existente en los espermatozoides de un paciente debe de existir alrededor del 95% de sus espermatozoides. Raras ocasiones se encuentran anomalías morfológicas que invariablemente den lugar a esterilidad, entre estas están: los espermatozoides de cabeza redonda, los de cabeza en forma de pera y los de cabeza en forma de alfiler.Recuento de los espermatozoides: para realizar el recuento se utiliza la cámara de Neubauer, y se realiza en el cuadrante central del hematimetro, el mismo que es utilizado para contar plaquetas y hematíes. Se cuentan en ambos retículos y se calcula un promedio. La diferencia entre ambos recuentos debe ser menor al 10%.El conteo total de espermatozoides suele reflejar el estado de la espermatogénesis. También muestra la relación directa con el volumen eyaculado y con el previo período de abstinencia sexual.Según el grado de concentración observada, se prepara diluciones de la muestra. Las cuales pueden ser 1/10, 1/20, 1/50.El diluyente a utilizar contiene NaHCO3, formalina al 35%(v/v) y agua destilada. Para determinar la concentración en millones/ml del semen, se divide el promedio del recuento por el factor de corrección que va a depender del tipo de dilución usada y del número de cuadrados que fueron contados.

Dilución (Semen + diluyente) -------------------- Numero de cuadrado contados----------------------------------------------------------------------- 25 -------10-------51+9----------------------------------------------------------------------10--------4--------21+19-----------------------------------------------------------------------5--------2----------11+49-----------------------------------------------------------------------2--------0.8------0.4

Otras células en el semenLeucocitos: se considera que un eyaculado normal debe haber menos de 1.000.000/ml. La presencia de cantidades mayores de leucocitos (leucocitospermia), se pudiera sospechar de una infecciones, pero la ausencia de ellos tampoco nos asegura que no existe una sepsis de las vías seminales. El número de células se calcula así= numero de células por contaje total de espermatozoides/100Células epiteliales: principalmente de la uretra, células espermatogénicas inmaduras de distintos tipos. La concentración de células debe medirse y dar su resultado en porcentaje. Se considera normal que el semen eyaculado no contenga más del 5% de estas células. La presencia de células espermatogénicas inmaduras en el eyaculado es un signo de irritación del epitelio germinal si se producen eyaculaciones repetidas. Su presencia requiere de otras pruebas para dar un diagnosticoConsideraciones de un semen normal

-Mas de 20.000.000 de espermatozoides/ml-Mas de 50% de los espermatozoides móviles (a+b), o mas del 25% categoría a-Mas del 30% de los espermatozoides con forma y tamaño normal

Nomenclatura de algunas variables del semen

-Aspermia: ausencia de semen. No hay eyaculado-Azoospermia: ausencia de espermatozoides en el eyaculado-Astenozoospermia: Disminución de la movilidad de los espermatozoides. Menos del 50% de espermatozoides con progresión lineal(a+b), o menos del 25% con progresión lineal rápida(a)-Hipospermia: Volúmen seminal menor de 2ml-Hematospermia: color pardo de la muestra de semen-Necrozoospermia: concentración, morfología de los espermatozoides normal y aumento de % de espermatozoides muertos.-Oligoospermia: numero de espermatozoides inferior a 20 millones/ml-Oligoastenoteratozoospermia: número de espermatozoides inferior a 20 millones/ml, disminución de la movilidad de los espermatozoides, aumento de formas anormales de los espermatozoides.-Teratozoospermia: aumento de formas anormales de los espermatozoides (más de un 30% o menos de un 50% de formas anormales)-leucocitospermia: presencia de 1.000.000 de leucocitos/ml-Normozoospermia: eyaculado normal. Concentración de espermatozoides 20.000.000/ml

Estudios que se le hacen al semen con el propósito de diagnosticar a presencia de algún problema de fertilidad

-Espermatograma-Espermocultivo-Recuperación de espermatozoides motiles-Prueba de viabilidad-Prueba de integridad del acrosoma-Determinación de anticuerpos antiespermaticos

Resultados:

Análisis de semenPaciente: No ObtenidoEdad: 27añoshora de toma de muestra= 8.30am

Examen físico:-Aspecto= después de la licuefacción(35min) aspecto homogéneo-Color= blanco amarillento- Ph= 8- Viscosidad= mas de 2cm- Volumen seminal = 5ml- Volumen minino de eyaculado= 80.000.000 de espermatozoides/ml

Examen microscópicoMotilidad= categoría aMas del 65% de los espermatozoides tienen movilidad progresiva rápidaViabilidad= mas del 75% de los espermatozoides están vivos móvilesMorfología= mas del 50% de los espermatozoides de formas normalesRecuento Total de espermatozoides=12 400.000espermatozoides/mlOtras células:-Leucocitos= 620.000 leucocitos/mlPara el rexcuento de espermatozoides se realizo una dilucion 1/10

Bibliografía

- Guía de laboratorio de bioquímica clínica. Universidad de oriente, Núcleo Bolívar
- www.wikipedia.org